如何从组织中提取核蛋白(如何从组织中提取核蛋白质)

1.1

摘要

核酸是由许多核酸聚合而成的生物大分子化合物，是生命最基本的物质之一。核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物和生物体中。核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸具有不同的化学组成和核酸序列。根据化学组成的不同，核酸可以分为核糖核酸，简称RNA和脱氧核糖核酸，简称DNA。

DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础，RNA在蛋白质的合成中起着重要作用，其中转运核糖核酸(tRNA)起着携带和转运活性氨基酸的作用:mRNA是合成蛋白质的模板；核糖体核糖核酸，简称rRNA，是细胞合成蛋白质的主要场所。

1.2

核酸提取样品

常见样本:血液、动植物组织、细菌、细胞、病毒、骨髓、体液等。

疑难样本:唾液、痰液、土壤、粪便、毛发、石蜡包埋组织、骨骼、牙齿、指甲、烟头等。

1.3

核酸提取方法

它包括DNA和RNA，两者都在细胞内与蛋白质结合。核酸提取的主要步骤是:裂解细胞去除与核酸结合的蛋白质、多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子。比如提取DNA分子时要去除RNA，反之亦然。通过沉淀纯化核酸，并除去杂质如盐和有机试剂。

1.3.1碱裂解法

碱裂解是基于DNA变性和复性的差异来达到分离的目的。

1.3.2.煮沸法

煮沸时，样品中的DNA通过核酸裂解物的作用释放出来。离心沉淀后去除杂质，上清液可用于PCR扩增。

1.3.3浓盐法

RNA和DNA是根据它们在电解液中的不同溶解度来分离的。常用的方法是用1M氯化钠提取。将获得的DNP粘液用含有少量辛醇的氯仿振荡，乳化，然后离心除去蛋白质。此时，蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相的中间，而DNA处于上层水相。DNA的钠盐可以用2倍体积的95%乙醇沉淀。

1.3.4苯酚提取法

作为一种蛋白质变性剂，苯酚抑制脱氧核糖核酸酶的降解。当匀浆用苯酚处理时，由于蛋白质与DNA之间的键被破坏，蛋白质分子表面含有许多类似苯酚的可溶的极性基团。蛋白质分子溶于酚相中，而DNA溶于水相。离心后，取出水层，重复操作多次，然后合并含有DNA的水相，利用核酸不溶于乙醇的性质，用乙醇沉淀DNA。这个时候DNA是一种非常粘稠的物质，可以用玻璃慢慢绕成一团取出来。这种方法的特点是将提取的DNA保持在自然状态。

1.3.5水浸提法

根据核酸溶于水的性质，组织细胞破碎后，用低盐溶液去除RNA，然后将沉淀物溶于水，使DNA完全溶于水。离心后，收集上清液，向上清液中加入固体氯化钠，调节至2。6M。加入2倍体积的95%乙醇，搅拌下立即将其搅拌出，然后分别用66%、80%和95%的乙醇和丙基铜洗涤，最后洗涤in/[即可得到DNA样品。这种方法提取的DNA中蛋白质含量较高，一般不使用。为了去除蛋白质，可以通过在提取过程中加入SDS来改进该方法。

1.3.6阴离子洗涤剂法

用SDS或二甲苯钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA。因为细胞中的DNA往往通过静电引力或配位键与蛋白质结合，而阴离子去污剂可以破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂来提取DNA。

1.3.7硅胶薄膜法

可用于手动提取或自动提取。

硅胶法提取核酸

1.3.8磁珠法

生物磁珠是一种新型的功能性固体载体，通常用于自动提取，其表面包覆有活性基团，可与多种生物活性物质偶联。它们还具有液体流动性和固体磁性材料的特性。它们可以在外部磁场的作用下定向移动和定居。去掉外磁场后，稍加振荡或抽吸，它们就能均匀地分散在液体中，从而使固液相的分离变得非常迅速和方便。通过简单的洗脱，可以获得高纯度的靶向。

磁珠核酸提取