三明治怎么加热(三明治没有烤箱怎么加热)

WB实验说起来简单，但是如果不注意小细节，就太容易出错了。是很多童鞋心中淡淡的忧伤。

所以我们做了一些WB实验基本操作的小视频，可以帮助WB实验新手全面了解实验过程，更快上手。

首先，童鞋们了解胶片转写流程，这是WB实验成败的关键。其中，“三明治”的制作尤为重要。

下图向我们展示了什么是“三明治”结构。三明治里的面包是滤纸，而三明治是凝胶和薄膜。

原则和目的:

Western Blot是将蛋白质转移到膜上，然后用抗体检测。对于已知的表达蛋白，可以用相应的抗体作为一抗，用融合部分的抗体检测新基因的表达产物。

Western Blot采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测物质为蛋白质，“探针”为抗体，标记的二抗用于“显色”。将通过PAGE分离的蛋白质样品转移到固体载体(如硝酸纤维素膜)上。固相载体以非共价键的形式吸附蛋白质，电泳分离的多肽类型和生物活性保持不变。以固相载体上的蛋白质或多肽为抗原，与相应的抗体反应，再与酶或同位素标记的第二抗体反应，通过电泳分离的特定目的基因表达的蛋白质成分，通过底物显色或放射自显影进行检测。这项技术也广泛用于检测蛋白质表达。

8.取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白浓度)，加入相同体积的2倍电泳加样缓冲液。

9.在沸水中沐浴3分钟。

10.加载样本。

11.电泳(浓缩凝胶20mA，分离凝胶35mA)。

12.用电转印膜仪转印膜(100ma，40分钟)。

13.胶片用丽春红染色，胶水用考马斯亮蓝染色。

14.蛋白质印迹显色试剂盒。

15.分析和比较记录。

以下工件可以帮助您解决这个问题:

同时转移四种凝胶

节省一半时间

大大提高效率。

最重要的是安全。

运行特性

可同时转印四块9×9cm凝胶转印时间为15-60min槽体高强度，免除液体渗漏的困扰专用开启式转移胶架，操作方便多重安全设计，解决操作安全问题

薄膜转移后密封注意:

薄膜转移后，薄膜上的其他空白色位置需要用密封液密封。西方的灵敏度一定程度上受限于密封做得好不好。脱脂奶是最常用的经济配方(实验来不及可以补充营养，哈哈)。使用这种封闭剂可能会造成背景污染，因为其中含有微量的生物素和碱性磷酸酶，所以不适合生物素-亲和素检测法(如果使用生物素标记的标记物，结果背景高，分析结果也可能受此影响)，脱脂乳也不适合碱性磷酸酶检测(AP)法。如果使用碱性磷酸酶检测系统，最好将封闭剂用6%酪蛋白+1%聚乙烯吡咯烷酮+10mmol/L EDTA磷酸缓冲盐65度加热1小时，保证碱性磷酸酶失活(可加入0.05%叠氮化钠，最好新鲜)。经济型脱脂奶的配方和AP不太兼容，HRP的底物选择范围更广，所以现在HRP越来越受欢迎。而叠氮化钠(NaN3)能使辣根过氧化物酶(HRP)失活。如果使用HRP检测系统，最好不要在封闭液中加入叠氮化钠。记住。封闭时间和封闭剂的量应该足够。如果封闭不彻底，一切都是徒劳。

如果选择AP作为显色方法，封闭时应选择Tris缓冲体系，不能使用PBS，因为PBS会干扰AP。