rsd的计算公式(Rsd重复性计算公式)

常见的定量分析方法分为面积归一化法、内标法和外标法。他们还不清楚吗？今天就和小姐姐一起梳理一下吧。

色谱分析的重要功能之一是样品的定量。色谱的定量基础是载气中组分的重量或浓度与检测器的响应信号成正比。常见的定量分析方法分为面积归一化法、内标法和外标法。人们往往很容易傻傻分不清内标法和外标法。

以内标法为例，选择与待测组分相似但能完全分离的组分作为内标(当然是不在样品中的组分)，然后配制待测组分和内标的混合标准溶液，通过注射得到相对校正因子。然后，将内标加入待测组分的样品中，进样后测量待测组分和内标的定量参数，用内标公式计算。

其实从定义上来说，外标法就是用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做标准曲线，测量样品的峰面积或峰高，在标准曲线上找出其对应的浓度。这是最常用的定量方法；内标法与外标法相对应。内标法是在准确称量的样品中加入一定量的纯物质作为内标，根据被测样品与内标的质量比和相应色谱峰面积的比值计算出被测组分的含量。

外标法需要将样品与标准品进行比较，但有时我们很难保证样品与标准品的体积相同。毕竟肯定有误差。此时采用内标法，即在外标法的基础上，在样品和标准中加入一种物质。通过改变添加物质的峰面积或峰高，可以看到我们标准品和样品的进样体积的差异，但同时也会引入添加物质的称量误差。因此，一般采用外标法进行定量。如果样品体积难以掌握，可采用内标法消除样品体积的误差。

外标法(标准曲线法、直接比较法)

首先，用待测组分的标准样品绘制标准工作曲线。具体方法如下:从标准样品中制备不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，注入等体积、准确量的样品，测量各峰的峰面积或峰高，以峰面积或峰高绘制样品浓度的标准工作曲线。这条标准工作曲线应该是一条穿过原点的直线。如果标准工作曲线不经过原点，说明测量方法存在系统误差。标准工作曲线的斜率是绝对校正系数。

当待测组分的含量变化不大，且已知该组分的大致含量时，可不必绘制标准工作曲线，而采用单点校正法，即直接比较法进行定量。单点校正法实际上是将原点作为标准工作曲线上的另一个点。因此，当方法存在系统误差时(即标准工作曲线不经过原点)，单点校正法的误差较大。所以规定y=ax+b，b的绝对值不超过100%，响应值为y的2%。

标准曲线法的优点:绘制标准工作曲线后，测定工作非常简单，计算时可直接从标准工作曲线上读出内容，非常适合分析大量样品。特别是标准工作曲线绘制出来后，可以使用一段时间。在此期间，通常可以使用标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定标准工作曲线是否仍然可以使用。

标准曲线法的缺点:色谱条件(检测器的响应性能、柱温、流动相的流速和组成、样品体积、柱效等。)对每个样本的分析很难做到完全相同，因此很容易造成较大的误差。此外，绘制标准工作曲线时，一般使用待测组分的标准样品(或已知准确含量的样品)，因此无法补偿样品预处理过程中待测组分的变化。

内标法

根据检测器上待测组分和对照品的响应值(峰面积或峰高)与对照品加入量的比值进行定量分析的方法称为内标法。

内标法的关键是选择合适的内标。内标应是原样品中不存在的纯物质，其性质应尽可能接近待测组分，且不与被测样品发生化学反应，同时应完全溶于被测样品。内标物的峰应尽可能靠近待测组分的峰，或位于待测组分的几个峰的中间，但不得与样品中的所有峰重叠，即完全分离。

内标法的优点:样品体积的变化和色谱条件的微小变化对内标法定量结果的影响很小，特别是在样品预处理(如浓缩、萃取、衍生化等)前加入内标时。)，然后预处理可以部分补偿样品预处理过程中待测组分的损失。为了获得高精度的结果，可以添加几个内标来提高定量分析的精度。

内标法的缺点:难以选择合适的内标，内标要准确称量，操作麻烦。内标法定量时，应测量待测组分和内标物两个峰的峰面积(或峰高)。根据误差叠加原理，内标法的定量误差中，峰面积测量引起的误差是标准曲线法的2-2倍，样品体积和色谱条件变化引起的误差比标准曲线法小得多。因此，总的来说，内标法的准确度和精密度优于标准曲线法。

标准加入法

本质上，标准加入法是一种特殊的内标法。当无法选择合适的内标时，将待测组分的纯物质加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下测量加入待测组分纯物质前后待测组分的峰面积(或峰高)，从而计算出样品中待测组分的含量。

标准加入法的优点:不需要另一种标准物质作为内标物质，只需要待测组分的纯物质，进样量也不必很精确，操作简单。如果在样品预处理前加入已知且准确量的待测组分，待测组分在预处理过程中的损失完全可以得到补偿，这是色谱分析中常用的定量分析方法。

标准加入法的缺点:要求加入待测组分前后两次色谱测定的色谱条件完全相同，以保证两次测定的校正因子完全相等，否则会造成分析测定误差。

选择内标有四个要求:

1.内标应该是样品中不存在的纯物质；

2.必须完全溶解在样品中，与样品中各组分的色谱峰能量完全分离；

3.内标加入量应接近被测组分；

4.色谱峰的位置应靠近被测组分的位置，或在几个被测组分色谱峰的中间。

内标法的优点是测量结果更准确。由于计算是通过测量内标物和被测组分的峰面积的相对值来进行的，所以在一定程度上消除了操作条件变化带来的误差。内标法的缺点是操作程序麻烦，每次必须准确称量内标和样品，有时很难找到合适的内标。

外标法简单，但样品量非常准确。应严格控制在与标准相同的操作条件下，否则会造成分析误差，得不到准确的测量结果。

内标法和外标法都是定量方法。至于哪种方法好不好，不能一概而论。我们要做不同的分析，面对不同的需求。另外我们还要分析成本分析的效率等等。我觉得简单有效的进行定量分析满足要求才是最重要的。

用下面的例子来说明:

1.过去，我对许多医药和农药中间体中的芳香族卤代化合物进行过持续的定量分析。在没有自动进样器的情况下，采用外标法进行定量分析，重现性和稳定性都很差，结果经常受到合成同行的质疑。其实仔细分析的原因不一定是外标法不适合这种定量分析。第一，我们的实验室仪器和手段是否已经调整到稳定合理的状态，例如，衬管是否干净，玻璃的位置是否合适(样品是否能尽可能汽化)，汽化温度是否合适，色谱峰形状是否对称(即样品是否与色谱柱匹配)，附近是否有其他色谱峰的干扰，应考虑何种进样方式(如快速进样或热针进样)。如果所有这些因素都考虑在内，精密度的要求应该按照GMP方法进行验证。同一样品6次以上进样的RSD和6次样品定量结果的RSD均可满足小于1.5%的要求，因此外标法完全适用，但必须考虑前面的影响因素，否则谈此方法的适用性就有失偏颇。出口产品的定量分析方法已经做了很多，很多都是一些药企提供的比较完善且经过验证的方法。内标和外标(均采用自动进样)均能满足RSD小于1.5%的要求。当一种方法能够满足测试要求时，内标和外标都是可行的。当然还有一个分析成本和分析时间的问题。内标的成本以及对照溶液和样品溶液的配制当然要比外标高。而且有时候可能会受到你实验室现有仪器和附属设备的影响，达不到一定的要求，定量分析是必须的。有时候，外部标准的结果可能更差。这时候你可能要考虑用内标法了，这种方法可以消除手动进样的误差，分流判别的影响，包括一些未知因素的平行误差。这个时候，内标就可能显示出它的优势了。

2.如上所述，作为方法验证，当用选定的外标法对同一样品配制的6个样品溶液进行定量时，当RSD均满足1.5%的要求时，可分为小于1%和大于1%和小于1.5%两种情况。如果结果的RSD小于1%，这种方法就没什么好怀疑的。如果结果的RSD大于1%，活性略低于1.5%，则该方法的可行性将受到质疑。毕竟这是一个方法验证，所以你要考虑上面1中提到的因素的影响。如果排除以上影响因素，RSD还是在1.5%左右，你应该试试内标。如果内标结果的RSD较好，证明你的方法受实验条件影响较大，只能用内标。

3.对于微量分析，如农药兽药残留分析、环境分析等，根据不同的限量标准，对精密度的要求要比常量分析宽松得多，有时可以允许RSD达到10%甚至更高。这时候外标法可能会有更大的应用空。

4.单考虑精度，排除成本和效率的其他因素，我个人认为内标优于外标。使用二乙醇胺作为内标和RTX-5胺(碱改性)15m×0.32mm×1.0um色谱柱，对中间体二氨基丙醇进行恒定的定量分析。将制备的对照溶液(含内标)注入自动进样器6针，目标物(二氨基丙醇)与内标物(二乙醇胺)峰面积比的RSD为0.18%。只有这六个样品的目标峰(二氨基丙醇)面积的RSD为0.71%。通过这个例子的结果，你会发现哪种方法的精密度更好，当然是内标更好。当然，这种化合物的检测方法可以根据以上验证数据用内标和外标进行定量，实验室可以自由选择。但是，内标和外标的精密度结果差异是显而易见的事实。

总结

综上所述，如果外标法的应用能够满足要求，当然首选外标法，毕竟简单方便。在精密度高、对结果准确度影响大、实验室条件不理想的情况下，有必要使用内标法。但是，无论使用哪种方法，方法的验证和确认都是非常重要的。只要按程序核实确认，就有其应用空。个人观点，供大家参考。

(内容来源:网络由小杰整理编辑)